### 羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒使用说明书

产品名称: 羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称: Test Kit for Antibodies to Sheep Foot and Mouth Disease Virus NSP (ELISA)

包装规格: 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途: 口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以口腔黏膜、蹄部及乳房皮肤的水泡和溃疡为特征。本试剂用于检测羊血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体，可用于口蹄疫野毒感染的筛查和辅助诊断。

原理: 本试剂盒由经预包被的口蹄疫病毒非结构蛋白重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，采用酶联免疫法（ELISA）检测猪血清及血浆样本中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体。实验中，当样品中含有抗体时，将与酶标板上的抗原结合，经过洗涤去除未结合成分后，再加酶标记物，形成特异性结合，通过添加TMB底物液与酶标结合物反应生成蓝色产物，显色的深浅与样品中特殊抗体含量成正相关。随后，加入终止液后，产物变为黄色，并可通过酶标仪测定吸光值，从而判断样品是否含有口蹄疫病毒非结构蛋白抗体。

试剂盒组成:

• 酶标记物：规格/96T×1 11ml×1(红盖)，96T×2 11ml×2(红盖)，96T×5 26ml×2(红盖)
• 样品稀释液：规格/96T×1 50ml×1(黄盖)，96T×2 50ml×1(黄盖)，96T×5 200ml×1(透明)
• 浓缩洗涤液：规格/96T×1 40ml×1(白盖)，96T×2 40ml×1(白盖)，96T×5 200ml×1(透明)
• 底物液A：规格/96T×1 6ml×1(白盖)，96T×2 11ml×1(白盖)，96T×5 26ml×1(白盖)
• 底物液B：规格/96T×1 6ml×1(黑盖)，96T×2 11ml×1(棕盖)，96T×5 26ml×1(黑盖)
• 终止液：规格/96T×1 6ml×1(黄盖)，96T×2 11ml×1(黄盖)，96T×5 26ml×1(黄盖)
• 阳性对照：规格/96T×1 10ml×1(红盖)，96T×2 15ml×1(红盖)，96T×5 20ml×1(红盖)
• 阴性对照：规格/96T×1 10ml×1(绿盖)，96T×2 15ml×1(绿盖)，96T×5 20ml×1(绿盖)
• 酶标板：规格/96T×1, 96T×2, 96T×5
• 盖板膜：125
• 自封袋：112
• 说明书：111
• 稀释板：125

储存及有效期: 需存放在2～8℃，有效期为12个月。开封后的包被板应避光存于2～8℃，并避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器: 必须具备450nm和630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备及可调微量移液器。

样品准备:

1. 采集动物全血并按常规方法制备血清，确保血清清亮，无溶血及污染。样品在1周内可存于2～8℃，长期保存则需-20℃。
2. 使用样品稀释液对待检血清进行10倍稀释（例如在稀释板中加入90μl样品稀释液后再加10μl血清，混合均匀）。阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用前，浓缩洗涤液需恢复至室温，使沉淀溶解，并用蒸馏水或去离子水按20倍稀释。

检验方法:

1. 使用前，将试剂盒在室温下放置30分钟以恢复至室温。
2. 取所需酶标板条，设阴性和阳性对照各2孔，其余板条需尽快密封，存放于2～8℃。
3. 对照孔分别加入阴性和阳性对照100μl，样品孔每孔加入样品稀释液90μl，再加入10μl稀释血清。注意：样本稀释比例为1:100。
4. 混匀并盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
5. 甩去孔内液体，每孔加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔添加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 洗涤，重复步骤5。
8. 每孔依次添加底物液A、底物液B各50μl，混合均匀，盖好盖板膜，置于37℃避光反应10分钟。
9. 每孔加入终止液50μl，混合均匀，并在450nm（可用630nm作为参考波长）下测定各孔的吸光值（A值）。

参考值: 在实验正常情况下，阴性对照应≤0.10，阳性对照应≥0.60。

检验结果解释:

1. 样品A值≥0.38为阳性；样品A值＜0.38为阴性。
2. 阳性样本的结果需结合临床及其他检测数据综合分析。

实验方法的局限性: 此检测结果仅供筛查使用，不能作为确诊依据。

注意事项:

1. 实验过程中需佩戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度，所有实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免与皮肤和衣物接触，若不慎接触，请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板取出后需恢复至室温后再开袋，未用完的酶标板应存放在干燥剂的密封袋中。
4. 浓缩洗涤液在低温时易结晶，使用前需恢复至室温以完全溶解。
5. 洗涤时各孔内需液体充满，以避免孔口存留游离酶。
6. 用于检测的样品须保持新鲜。
7. 试验结果的判定需以酶标仪的读数为准。
8. 不同批号的试剂成分不可混用。

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